“Jaunā koronārā vīrusa pneimonijas diagnostikas un ārstēšanas programma (devītā izdevums)” izmanto nukleīnskābju noteikšanas Ct vērtību ≥35 kā vienu no svarīgākajiem pamatiem izolācijas pārvaldības vai izrakstīšanas atbrīvošanai.Tātad, ko attēlo nukleīnskābes noteikšanas komplekta Ct vērtība?Vai dažādu komplektu Ct vērtības ir salīdzināmas?Vai, jo zemāka ir Ct vērtība, jo labāka ir komplekta veiktspēja?
Ct vērtība (Threshold Cycle, Ct) ir PCR ciklu skaits, kad reālā laika fluorescences kvantitatīvā fluorescences signāla intensitāte pārsniedz iestatīto slieksni.Nukleīnskābju noteikšanas komplekti izmanto jauno vainagu kā piemēru.Viena un tā paša komplekta vienai un tai pašai reakcijai, lai noteiktu divus vīrusu saturošus paraugus A un B, Ct vērtības lielums zināmā mērā atspoguļo vīrusa gēna kopiju skaitu, tas ir, vīrusa slodzi.Jo zemāks B parauga Ct, jo lielāka ir vīrusu slodze.Ct vērtība ir apgriezti proporcionāla vīrusa slodzei un tā infekciozitātei.Par dažādu reāllaika fluorescences kvantitatīvo komplektu plusiem un mīnusiem nevar spriest tikai pēc Ct vērtības lieluma, jo dažādu komplektu Ct vērtības nav salīdzināmas.Komplekta veiktspējas novērtējums ir jāmēra no jutīguma (minimālā noteikšanas robeža), specifiskuma, precizitātes, stabilitātes un diagnostikas pielietojuma aspektiem.Katram reaģentu ražotājam ir savi astoņpadsmit cīņas mākslas veidi, un tiem ir savs maģiskais spēks pielietojumā, tāpēc es šeit neiedziļināšos.
Parastajiem reālā laika kvantitatīvās PCR (QPCR) analīzes instrumentiem/sistēmām Ct vērtību iegūšana un to plašā izmantošana patogēnu noteikšanas lietojumos ir pazīstama ikvienam.Attīstoties nozarei un tehnoloģiju attīstībai, QPCR iekārtas un reaģenti ir saskārušies ar iespējām un izaicinājumiem.Yiou Think Tank (2021. gada izpētes ziņojums par Ķīnas ģenētiskās testēšanas nozari: tehnoloģija) analizēja, ka lielākā daļa uzņēmumu manas valsts QPCR nozarē saskaras ar kopīgām problēmām, kuru pamatā ir tehnoloģija.Reaģējot uz šīm problēmām, risinājumi galvenokārt tiek iedalīti divos veidos: tehnoloģiju uzlabošanas paātrināšana un jaunu tehnoloģiju ieviešana.
POCT QPCR molekulārajai diagnostikai ir viens no nozares attīstības virzieniem, un veiktspējas uzlabošana ir svarīgs faktors, lai paātrinātu tehnoloģijas pielietošanu.POCT iekārtām ar viena parauga QPCR caurlaidspēju, kā optimizēt vienas reakcijas galvenā parametra Ct vērtību pētniecībā un attīstībā?Tāda pati iekārta, viena un tā pati reakcijas sistēma un tā pati šablona koncentrācija, teorētiski, jo lielāka ir vienas reakcijas Ct vērtība, jo zemāka ir fermenta efektivitāte reakcijā.
Enzīmu reakcijas efektivitātes uzlabošanas un Ct vērtības optimizēšanas procesā vispirms var analizēt tipisku 40 PCR ciklu fluorescences kvantitatīvās amplifikācijas līkni.Pastiprināšanas līkne zemāk esošajā attēlā ir sadalīta fluorescences fona fāzē, eksponenciālās amplifikācijas fāzē, lineārajā fāzē un plato fāzē.Lai sasniegtu zemāku fluorescences fonu, cik vien iespējams to atšķirt no agrīnas eksponenciālās amplifikācijas fluorescences vērtības, ir nepieciešams testēt no reakcijas palīgmateriālu nesēja, praimera zondes dizaina skrīninga un reakcijas bufersistēmas.Eksponenciālais amplifikācijas periods ir vistiešākā fermentu aktivitātes reakcija, un tas ir arī pierādījums perfektai POCT aprīkojuma, reakcijas nesēju un reaģentu koordinācijai.Šobrīd visos aspektos ir jāpielāgo un jāpārbauda iekārtu temperatūras kontrole, optiskā signāla iegūšana un analīze, nesēja bioloģiskā saderība un reaģentu sistēmas veiktspēja.Visbeidzot, visa pastiprināšana ir pabeigta, un rezultāti ir jāuzrāda ar stingru datu algoritmu, lai iegūtu saprātīgu Ct vērtību.
Neliels solis Ct vērtības optimizēšanā ir neskaitāmie pētniecības un attīstības personāla soļi.Dienas un nakts satraukumā un satraukumā katru reizi, kad "kalni un upes nekur nav redzami, vītoli ir tumši un ziedi ir spilgti un ir cits ciems", kas dod mums drosmi un degsmi virzīties uz priekšu. atkal.
Izlikšanas laiks: 29. septembris 2022